生物發(fā)光實驗

1.確定螢光素酶

常見的熒光素酶包括螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase，Fluc）、海洋蛋白質(zhì)熒光素酶（Renilla luciferase，Rluc）和高司氏熒光素酶。它們在特定條件下都能催化各自的底物產(chǎn)生相應(yīng)的光，而無需外部激發(fā)器。其中，Fluc是應(yīng)用最為廣泛的熒光素酶。

推薦使用Goldbio的D-Luciferin做為螢火蟲熒光素酶的底物

2.構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)螢光素酶細(xì)胞株

穩(wěn)轉(zhuǎn)株即穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，指的是基于某一細(xì)胞系構(gòu)建的持續(xù)過表達(dá)或干擾某特定基因的細(xì)胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應(yīng)用的穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建方法，具有高效整合、目標(biāo)細(xì)胞廣泛等特點。

3.驗證穩(wěn)轉(zhuǎn)株

構(gòu)建得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株后，可以進(jìn)行體外實驗以驗證Fluc穩(wěn)轉(zhuǎn)株效果?？梢詫⑸L良好的Fluc細(xì)胞消化，隨后用培養(yǎng)基稀釋成系列梯度濃度并分別接種于96孔板中，每孔100 μL，每個濃度設(shè)置三平行孔。

4.穩(wěn)轉(zhuǎn)株注射動物

成功構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株后，即可進(jìn)行動物移植模型構(gòu)建。

5. 注射底物

注射的細(xì)胞一般會在2-3周成瘤（具體時間根據(jù)細(xì)胞種類，接種數(shù)量，細(xì)胞活力會有所不同），可以根據(jù)實驗設(shè)計進(jìn)行一定處理。

6.活體成像

活體成像建議直接使用帶有麻醉裝置的小動物活體成像儀，這樣操作更方便，而且可以更準(zhǔn)確的控制小鼠麻醉的情況。如儀器不帶麻醉裝置，也可自行麻醉小鼠后置于小動物活體成像儀中進(jìn)行成像。檢測途中要注意防止小鼠中途蘇醒而離開成像臺。

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